Interferenz Faktoren a PCR Reaktiounen

Wärend der PCR Reaktioun, e puer interferéiere Facteure dacks opgetrueden.
Wéinst der héijer Sensibilitéit vu PC, Kontong, genannte fir eng vun deenen wichtege Faktoren ze produzéieren, a kënnen falsch positiv Resultater produzéiert an.
Gläich kritesch sinn déi verschidde Quelle déi zu falschen negativen Resultater féieren. Wann een oder méi üblech Deeler vun der PCR Mëschung oder Vermeidungsvertrikatioune vun der Vermeidung vun der Vermëttlung hemmt oder gestéiert gëtt, huet d'Diagnos Assasishay. Dëse Katoultier kënne reduzéieren Effizienz a wéineg negativ Resultater.
Zousätzlech zu Inhibititioun, Verloscht vun Zilkomanäram Integritéite kann wéinst Versandbedingunge ginn an / oder Späicherbedingunge virum Probe Publikration. Virun villen, héijen Temperaturen oder Mathemkung kënne bis op d'Zellen an Nukle-Sektagen féieren. Zell an Tissue Fixatioun a Paraffin Embedding sinn bekannt Ursaache vun der DNA Fragmentéierung an e bestänneg Problem (kuck Figuren 1 an 2). Ebeen wor nimigiale Isatioun an der Direktioun an der ofipi sinn net hëllefen.

Bild 1 | Effekt vun Immobiliséierung op DNA Integritéit
D'Agaroéenaarmeldlännerunge weisen datt d'Qualitéit vun den DNA existéiert vun Parcsin Sekteren vun Doheem ausgerränke ginn. DNA VUN ENGEM Duerchschnëtt ëmschnëttlech Broschtlängt déi am Extrakter präsent sinn, ofhängeg vun der Fixmethod. DNA gouf nëmme konservéiert wann ech an enger gebierteger gefruerer Proben fixéiert an a Buffrale neutrale formalinin war. D'Benotzung vun enger staarker sauer Bouin fixativ oder onbeschiedegt, formic Said-enthalen formellesch ass an engem bedeitende Verloscht vun DNA. Déi verbleiwen Fraktioun ass héich fragmentéiert.
Op der lénker, d'Längt vun de Fragmenter gëtt a Kilobase ausgedréckt (KBP)

Figu 2 | Verloscht vun der Integritéit vun der Kikomeräure Ziler
(a) A 3'-5 'Spalt op béiden Sträicher resultéieren an enger Paus an der Ziel DNA. D'Synthese vun DNA wäert nach ëmmer op der klenger Fragment. Awer wann e Primer Annulatioun op der DNA Brodgment fehlend gëtt, just linear Amplifikatioun geschitt. Am meeschte gënschtegste Fall, kënne d'Fragmenter all aner resürréieren, awer d'Rëlfte sinn kleng an ënnescht an ënnendrënner.
(b) Verloschter, haaptsächlech noutwenneg an Duerchdrank an Thymidine Dimidine Dimideren, féiert zum Ralling an der Unzuel vun den H-Obligatiounen an eng Ofsenkung Wärend der länglecher Erwiermungsphase ginn d'Primmer ewech vun der Matrix DNA an wäert och net ënner manner ënner manner strenge Konditiounen gesinn.
(c) ugrenzend Thymine Basen bilden en TT DIMER.
En anert gemeinsame Problem deen dacks zu Molekular Diagnostiks geschitt ass déi manner-wéi optimal Verëffentlechung vum Zilkierper am Verglach zu Phaholoformatioun. An extremen Fäll, dëst kann mat falschen Negativer verbonne sinn. Vill Zäit ka gespäichert ginn duerch kachend Lysis oder enzymatesche Verdauung vun der Zelldris, awer dës Method resultéiert dacks an enger gerénger PCR Sensibilitéit wéinst net genuch Kuederverännerung.

Inhibitioun vu polymerer Aktivitéit während Ampliwwerung

Déi Geneenzen gëtt et als Container vun der Generaler benotzt fir all Facteloner ze beschreiwen déi zu verkakokt Eis Resultater féieren. An engem krein Biildmäck, deen sech an der Aktivitéit vun der éischter vun der Enzel benotzt oder, déi, déi egréisste Produktioun duerchsannt ass, fir MYM2 DNACHS MYM2 NA an engem Group magesche Biochmemiere, Handloser ass limitéiert un der Aktivitéit vun der Enzymart, I, dat heescht obfbriechend Produktioun duerch TAYSA.
Komponenten an der Probe oder verschidden Poppen an den Aktualisanten enthalen d'Réckte kënnen d'Enzzome hemmt oder falscht an falschen negativen.
Wéi vill Interienneit tëscht den Reaktioun Komponenz an Orschalyse get och als "Pakthore 'gesied. Wann d'Integritéit vun der Zell duerch Isolatioun gestéiert gëtt an d'Käre sauer, Interaktioune tëscht der Probe a senger Wolleken an ass Léisung. Zum Beispill, 'Scavengers kënnen Single bindelen oder duebel gestrandend DNA duerch net-Covalent Interraktioune bannen an interferéieren andeems se d'Zuel vun de PCRS opleet.
Allerdéngs sinn phusteschkënnt hollännesch Prinzipitéitspoiren an Fett méi fir Kliniken-Kompetenz vun der Ëmwelt, doduerch Dovorstänn wunnen (Hahren) a Kompetenzen) a Korresentkriuser, ouni Koronstänn an der Ëmwelt) a Kompetenzen) a Kompetenzen) a Kompetenzen), Ooffaart) a Kompetenzen) a Kompetenzen) a Kompetenzen an der Ëmwelt) a Kompetenzen), Ooffaart) a Kompetenzen) a Kompetenzen) a Kompetenzen) a Kompetenzen) a Kompetenzen) a Kompetitiv sammelen, dowéinst an d'Ëmwelt) a Kompetenzen) a Kompetenzen) an Heegontrecht) a Kompetenzen) a Kompetenzen) a Kompetenzen) a Kompetitiv liichteien) gin

Méi prevalent Pradbiefer kënnen a Bakterien fonnt ginn an eng koriphyotesch Zellen, Net-Zil DNA, DNA-Bindelcolomecomekuléis vu Tissurater wéi Handstoffalls a Laboratik Riedifikatioun vun de Wander an oder nodeems Erausfall determinéiert ass fir PC unzelueden.
Haut, verschidde automatiséiert Extraktiounsausrüstung kënnen vill manuelle Protokoller ersetzen, awer 100% Erhuelung an / oder Purfrist vun Ziler erreecht gouf ni erreecht ni. Potenziell Inhibitoren kënnen nach ëmmer an der purgestifiéiert Kukleeschäuren präsent sinn oder vläicht scho beaflossen hunn. Verschidden Strategien existéieren fir den Impakt vun Hemkelen ze reduzéieren. De Choix vun der entspriechender Polymerer kënnen e wichtegen Impakt op der Inhibitor Aktivitéit hunn. Aner bewisen Methoden fir PCR Inhibitioun ze reduzéieren, fällt eropgezunn Konzentratioun Konzentratioun oder applizéieren wéi BSA.
Inhibitioun vun der PCR Reaktiounen kënnen duerch d'Benotzung vun internen Prozessqualitéitskontrolle bewisen ginn (IPC).
Care must be taken to remove all reagents and other solutions in the extraction kit, such as ethanol, EDTA, CETAB, LiCl, GuSCN, SDS, isopropanol and phenol, from the nucleic acid isolate by a thorough washing step. Ofhängeg vun hirer Konzentratioun, kënnen se aktivéieren oder d'PCR aktivéieren oder hemmt.